Volcano3G® 是 Medix Biochemica 品牌旗下分子診斷系列之一的原料,單支即用型預(yù)混液,其核心的工程化聚合酶兼具反轉(zhuǎn)錄活性,具有極高的耐熱性及穩(wěn)定性,可用于 DNA 或 RNA 樣本的 (RT)-qPCR 檢測(cè)。
省時(shí) ? 可至零步法 RT-qPCR (不含單獨(dú)反轉(zhuǎn)錄程序步驟),更快獲得檢測(cè)結(jié)果;
省力 ? 單支全預(yù)混型原料,可用于粗樣本直擴(kuò);
省成本 ? 雙功能酶且無(wú)需特殊條件激活;
其他 ? 實(shí)力耐高溫,超強(qiáng)穩(wěn)定性。
Volcano3G® 可達(dá)到 95℃ 半衰期 >40min,具有極高的耐熱性。以 RNA 類樣本為例,在 45~95℃ 溫度范圍內(nèi)依然保持高效的 RNA 反轉(zhuǎn)錄和 DNA 擴(kuò)增效率 (圖 1)。
在 RT-qPCR 過程中,較高的反轉(zhuǎn)錄溫度有助于減少靶基因中形成的 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu),提高檢測(cè)特異性及靈敏度,整體提升反應(yīng)性能。
圖1. Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix (#6101) 高達(dá)95°C熱穩(wěn)定性
實(shí)驗(yàn)組:Volcano3G®、供應(yīng)商B、C試劑,于45~95℃加熱15min后,用于SARS-Cov-2為樣本的RT-qPCR檢測(cè),得到實(shí)驗(yàn)組Cq值。
對(duì)照組:Volcano3G®、供應(yīng)商B、C試劑,用于SARS-Cov-2為樣本的RT-qPCR檢測(cè),得到對(duì)照組Cq值。
Cq (對(duì)照組) - Cq (實(shí)驗(yàn)組) =ΔCq,增加的ΔCq值則表明在恒定模板量前提下發(fā)生延遲或沒有擴(kuò)增。
供應(yīng)商B (綠色)、C (橙色) 經(jīng)過高溫處理后,增加的ΔCq表明在恒定模板量前提下發(fā)生延遲或沒有擴(kuò)增,而Volcano3G® (黑色) 經(jīng)過高溫后依然保持高效酶活性,具有更優(yōu)的熱穩(wěn)定性。
基于 Volcano3G® 的耐高溫屬性,采用高溫反轉(zhuǎn)錄一步法 RT-qPCR (70°C 反轉(zhuǎn)錄步驟溫度),可達(dá)到 RNA 2.5 拷貝/反應(yīng)的靈敏度。
相較于其他供應(yīng)商常規(guī)一步法 RT-qPCR (50°C 反轉(zhuǎn)錄步驟溫度),應(yīng)用 Volcano3G® 的反應(yīng)結(jié)果更加穩(wěn)定,并且 RT-qPCR 的反應(yīng)靈敏度更高 (圖 2)。
圖2.Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix (#6101) 高溫反轉(zhuǎn)錄RT-qPCR反應(yīng),和其他供應(yīng)商常規(guī)一步法RT-qPCR反應(yīng)靈敏度的對(duì)比
Volcano3G® 預(yù)混液中的酶成分,和其他供應(yīng)商的 Taq DNA 聚合酶,同時(shí)在21°C條件下過夜后進(jìn)行反應(yīng)測(cè)試,Volcano3G® 中的酶活性相對(duì)穩(wěn)定,反應(yīng)信號(hào)強(qiáng)度及靈敏度均未受影響 (圖 3)。
圖3. Volcano3G® 酶成分和其他供應(yīng)商Taq DNA聚合酶的常溫穩(wěn)定性表現(xiàn)對(duì)比
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix |
100/500 reactions |
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
Volcano3G® RT-PCR 2x Master Mix (+GreenDye) |
100/500 reactions |
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