人類(lèi)白細(xì)胞抗原 (human leukocyte antigen, HLA) 又稱(chēng)移植抗原，與同種異體組織器官移植以及移植物的排斥反應(yīng)相關(guān)。而 HLA 組織配型是影響器官移植、造血干細(xì)胞移植存活率及受者生存質(zhì)量的重要因素之一。
HLA 基因具有高度的多態(tài)性，決定了所表達(dá)的 HLA 抗原分子的多態(tài)性。目前主要利用基因分型檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行 HLA 分型，相較于血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)方法，具有更高的靈敏度和準(zhǔn)確度，并且可以檢測(cè)出更多分型。
針對(duì)聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物 (polymerase chain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP) 的 HLA 基因分型檢測(cè)方法，Medix Biochemica HiDi® 系列原料酶對(duì)于引物 3' 末端僅單獨(dú)一個(gè)錯(cuò)配，即具有高特異性，且無(wú)論是轉(zhuǎn)換型或顛換型錯(cuò)配，均可高效鑒別，極大程度提高了 HLA 基因分型的效率、靈敏度和準(zhǔn)確性。
圖1. PCR-SSP 方法應(yīng)用實(shí)例 (HiDi®DNA polymerase, Medix Biochemica)
Hela 細(xì)胞中提取 gDNA 為模板 (1 ng/µl模板濃度)，分別針對(duì) C-等位基因和 A-等位基因設(shè)計(jì)引物序列 (圖1A)，使用 HiDi® DNA polymerase 分別進(jìn)行擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)表明：C-等位基因特異性引物可有效擴(kuò)增產(chǎn)物，而 A-等位基因特異性引物幾乎沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物 (圖1B)，并通過(guò)熔解曲線分析同時(shí)被證實(shí) (圖1C)。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析其有效擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度約 109 bp，達(dá)到高效鑒別特異性基因目的。
◆ 獨(dú)特的工程化聚合酶，具有高效鑒別能力 (High Discrimination) ；
◆ 靈敏度可至 104 個(gè)拷貝野生型基因背景中，檢測(cè)到小于 10 拷貝突變 ；
◆ 可高效鑒別引物 3' 末端的單堿基轉(zhuǎn)換或顛換型錯(cuò)配 ；
◆ HLA 基因分型、甲基化檢測(cè)、 CRISPR 等廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景。
|
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
|
HiDi® Taq 2x PCR Master Mix (探針?lè)? |
|
|
HiDi® Taq DNA polymerase (探針?lè)? |
|
|
HiDi® DNA polymerase (染料法) |
|
|
HiDi® 2x PCR Master Mix (染料法) |
基于直接測(cè)序法 (sequence-based typing, SBT) 的 HLA 基因分型檢測(cè)，是一種可靠的 HLA 基因分型方法，可準(zhǔn)確確定新的 HLA 等位基因。
Medix Biochemica PlexTaq 系列原料酶，其獨(dú)特的 DNA 聚合酶確保了多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)的高特異性能，為后續(xù)測(cè)序進(jìn)行 HLA 分型檢測(cè)提供強(qiáng)有力的保障。
圖2. PlexTaq®5x qPCR Multiplex Master Mix 用于多重qPCR
經(jīng)凍干的 PlexTaq®5x qPCR Multiplex Master Mix 用于擴(kuò)增檢測(cè)病原樣本的三個(gè)靶點(diǎn)及對(duì)照實(shí)驗(yàn)，其樣本設(shè)置 4 組濃度梯度，每組 2 個(gè)復(fù)孔。
◆ 穩(wěn)定且高效多重反應(yīng)，可至 30 重多靶點(diǎn)擴(kuò)增；
◆ 無(wú)基因偏好，均勻擴(kuò)增基因；
◆ 適配體熱啟動(dòng)配方，快速啟動(dòng)功能并減小錯(cuò)誤率；
◆ 可省略樣本核酸提取步驟，支持粗樣本直擴(kuò)，更快獲得可靠結(jié)果；
◆ 可凍干形式，包含所有凍干所需輔料，更加便捷滿足凍干需求。
|
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
|
Taq DNA Polymerase Hot-Start |
400/4000 U |
|
|
PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix |
100/500 Reactions |
參考資料：《人類(lèi)白細(xì)胞抗原基因分型檢測(cè)體系技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》
聯(lián)系我們
Medix Biochemica China
上海墨迪斯醫(yī)療技術(shù)有限公司
上海市閔行區(qū)浦江鎮(zhèn)綠洲環(huán)路10號(hào)6幢11層
電話：021-68119180,68119105,68119181
郵箱：medixchina@medixbiochemica.com
網(wǎng)站：onb2b.cn
