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——零步法RT-PCR檢測

對于RNA樣本檢測，常規(guī)傳統(tǒng)的一步法檢測，需要依賴于單獨的逆轉錄酶先進行反轉錄、完成cDNA合成后，再啟動DNA聚合酶活性、進入循環(huán)擴增環(huán)節(jié)，整個反應過程耗時相對較長，需要雙酶協(xié)同工作，對于體系優(yōu)化具有一定挑戰(zhàn)。
Medix Biochemica重磅推出雙功能重組酶預混試劑——Volcano3G^?，具有高達95℃的熱穩(wěn)定性，兼具逆轉錄酶和DNA聚合酶活性，實現(xiàn)零步RT-PCR、粗樣本直擴檢測。

雙管齊下

兼具逆轉錄酶和DNA聚合酶活性

Volcano3G^?預混試劑中，采用的工程化重組Taq DNA聚合酶，兼具逆轉錄酶和DNA聚合酶活性，可同時實現(xiàn)反轉錄cDNA的合成和DNA擴增，真正實現(xiàn)零步法RT-PCR檢測。

Volcano3G^?中使用的兼具逆轉錄酶活性的雙功能 Taq DNA聚合酶，適用于RNA和/或DNA模板的檢測(藍色實線          、黃色實線          )，而普通Taq DNA聚合酶，僅適用于針對DNA模板的擴增檢測(黃色虛線.......)，不能進行RNA反轉錄(藍色虛線.......)。

引用文獻：Johannes W. P. Kuiper, Timo Baade, et al. Detection of SARS-CoV-2 from raw patient samples by coupled high temperature reverse transcription and amplification. PLoS One. 2020 Nov 2;15(11):e0241740.

Volcano3G^?快速零步法 RT-PCR，相較于傳統(tǒng)一步 RT-PCR，節(jié)省了15+5 min單獨逆轉錄和預變性過程，極大程度縮短了檢測時間。

穩(wěn)健如飛

零步法RT-PCR檢測，縮短反應時間，支持粗樣本直擴

Volcano3G^?基于適配體修飾熱啟動酶配方，支持在高溫條件下即時啟動循環(huán)，無需單獨的樣本提取步驟，實現(xiàn)粗樣本直接擴增，并且在雙功能工程化酶的作用下，極大程度縮短檢測時間。

烈火真金

高達95℃真正耐高溫的雙功能酶

Volcano3G^?熱穩(wěn)定性高達95℃。在45~95℃溫度范圍依然保持高效的RNA逆轉錄和DNA擴增效率。較高的逆轉錄溫度有助于減少靶基因中形成的RNA二級結構，提高引物特異性，從而提高擴增效率。

實驗組：Volcano3G^?、供應商B和供應商C試劑，于45~95℃加熱15min后，用于SCV2為樣本的RT-qPCR檢測，得到Cq(實驗組)。

對照組：以SCV2為樣本，分別使用Volcano3G^?、供應商B和供應商C試劑進行擴增檢測，得到Cq(對照組)。

根據(jù)Cq(對照組)- Cq(實驗組)得到的ΔCq值，可以看出供應商B和供應商C(綠色、橙色)經過高溫處理后，增加的ΔCq表明在恒定模板量前提下發(fā)生延遲或沒有擴增，而Volcano3G^?(黑色)經過高溫后依然保持高效酶活性，具有更優(yōu)的熱穩(wěn)定性。

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